中文名稱：考馬斯亮藍(lán)G250。二甲花青亮藍(lán)
英文名稱：Coomassie Brilliant blue G-250 (C.I. 42655)，rilliant blue G
分子量：854.04 g/mol
分子式：C47H48N3NaO7S2
CAS NO.：6104-58-1
λmax. (buffer pH 7.0)：577 - 584 nm
E 1 %/1 cm, λmax. (pH 7.0)：450 - 570
用途：亮藍(lán)G250，是一種甲基取代的三苯基甲烷，染色靈敏度不如R250，但比氨基黑高3倍，馬斯亮藍(lán)G-250在游離狀態(tài)下呈紅色，最大光吸收在465nm；當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長(zhǎng)下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比。 考馬斯亮藍(lán)G250是布拉德福德(Bradford)蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分。它在三氯乙酸中不溶而成膠體，能選擇地染色蛋白而幾乎無(wú)本底色。所以常用于需要重復(fù)性好和穩(wěn)定的染色，適于作定量分析。G250常用的蛋白染料，作定性試驗(yàn)用,染色后為藍(lán)綠色
考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量
該方法用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的定量是比較精確的，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過(guò)0．2%影響測(cè)定結(jié)果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于細(xì)胞骨架的檢驗(yàn)。
1．Bradford濃染液的配制：
將100mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50m1 95%乙醇，加入100ml濃磷酸，然后，用蒸餾水補(bǔ)充至200ml，此染液放4℃至少6個(gè)月保持穩(wěn)定。
2．標(biāo)準(zhǔn)曲線蛋白質(zhì)樣本的準(zhǔn)備：
盡量使用與待測(cè)樣本性質(zhì)相近的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)品，例如測(cè)定抗體，可用純化的抗體作為標(biāo)準(zhǔn)。如果待測(cè)樣本是未知的，也可用抗體作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之間繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3．溶解：
將待測(cè)樣本溶于100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的緩沖溶液相同(最好用PBS)。
4．稀釋：
按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結(jié)合溶液，如出現(xiàn)沉淀，過(guò)濾除去。
5．作用：
每個(gè)樣本加5ml稀釋的染料結(jié)合溶液，作用5～30min。染液與蛋白質(zhì)結(jié)合后，將由紅色變?yōu)樗{(lán)色，在595nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度。注意，顯色反應(yīng)不得超過(guò)30min．
6．計(jì)算：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣本的濃度。
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產(chǎn)品詳情
AppliChem A3480 Coomassie Brilliant blue G-250 (C.I. 42655) 10g,25g,100g
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